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2016-08-20

Cubecrystal膜蛋白结晶板

人体约三分之一的蛋白都是膜蛋白,是众多生理功能的承担者。膜蛋白参与大量的生理活动,如营养物质交换、信号传递和免疫反应等。因各种原因引起的膜蛋白功能障碍会引起各种疾病。同时膜蛋白也是众多数药物作用的靶点,因此对膜蛋白结构和功能的研究也就显得尤为重要。


然而,现阶段人类对膜蛋白的了解,特别是其三维空间结构的了解却知之甚少,除了膜蛋白难以获得而外,由于膜蛋白特殊的亲水/疏水特性,适用于可溶蛋结晶的气相扩散法(vapor diffusion)倾向扩散法并不是适用于膜蛋白结晶。因此,膜蛋白在体外能否顺利结晶以便于后续结构研究也是制约其发展的瓶颈之一。为了解决膜蛋白结晶这一难题,在1996年,Landau和Rosenbusch通过脂质立方相(LCP)技术成功的获得了完整的细菌视紫红质蛋白的3.7埃晶体结构。在此之后,通过脂质立方相结晶膜蛋白成为了一个广泛实用技术被大多数膜蛋白研究人员所采用。


然而LCP操作繁琐且耗时较长,因此在进一步研究LCP和气相扩散法的优势后,德国Cube Biotech的科研人员推出了基于CIMP (Controlled in meso phase)技术的Cubecrystal膜蛋白结晶板,此技术运用了LCP结晶蛋白的原理,同时结合了气相扩散法的效率将膜蛋白结晶能力推向了一个新的高度。


CIMP技术会实现的几个阶段:(1)Hydrated LCP phase:水含量90%到45%之间。(2)Lipidic cubic phase (LCP) :水含量45%和26%之间的中间相。(3)Lamellar phase:蛋白质之间的联系增强,此阶段含水量低于26%。晶体的形成可以发生在这些阶段中的任何一个。我们的模型蛋白细菌视紫红质,得到了不同几何形状、晶体大小和不同阶段的衍射的蛋白结晶。


Cubecrystal膜蛋白结晶板的操作极为简单,结晶板是基于紫外透光的MRC 2孔结晶板为基础,每一单元分为结晶双孔和一个蓄液池组成。两孔蛋白结晶孔已经预涂脂质(高纯度mono-olein )。纯化的蛋白溶液可以直接滴加到蛋白质孔内,只需简单的几步操作便能得到膜蛋白结晶。


网页链接:


引用文献:

1. Kubicek J., Schlesinger, R., Baeken C., Büldt, G., Schäfer, F., Labahn, J. (2012) Controlled in meso phase crystallization - a method for the structural investigation of membrane proteins. PLoS One 7(4):e35458.
2. Landau EM, Rosenbusch JP (1996) Lipidic cubic phases: A novel concept for thecrystallization of membrane proteins. Proc Natl Acad Sci USA 93:14532–14535.
3. Caffrey M (2008) On the mechanism of membrane protein crystallization in lipidic mesophases. Cryst Growth Des 8: 4244–4254.