PureCube 100 NTA Agarose
组氨酸标签是应用广泛的蛋白纯化标签,其优点包括标签尺寸小、低免疫原性、在蛋白自然和变形状态下都保持有效性,以及在去污剂和多种添加剂成分环境下依然保持有效等多方面优点。为了进一步提高纯化体系在纯化过程中的稳定性,Cube Biotech现推出了新型PureCube 100 INDIGO Ni-Agarose系列产品。这款新型的填料是以高交联度且平均直径为100 µm的琼脂糖为基材,可用于更高流速要求的重力柱纯化和FPLC方面的应用。
(1)100 µm 琼脂糖微球提供高流速;
(2)在去污剂和多种添加剂成分环境下依然保持有效,洗脱几次后其纯化的效率几乎不会降低,实用pH为4-9;
(3)高结合率(高达80 mg/ml)和高纯度;
(4)高流速下仍保持高纯度蛋白纯化能力;
(5)即使在低目标蛋白浓度环境下保持高回收率;
(6)可直接适用于真核细胞培养液
针对pull-down实验,Cube Biotech同时提供新型PureCube INDIGO Ni-MagBeads磁性微球产品系列。此系列同样系列采用了全新的INDIGO配基并结合镍离子。此系列产品在高达20 mM DTT 和 20 mM EDTA环境体系里具有很高的目标蛋白结合能力(图4)。每批PureCube INDIGO Ni-MagBeads均以25%悬浮液状态出货。
图4:使用 PureCube INDIGO Ni-MagBeads来纯化组氨酸标签蛋白,即使在高达10 mM DTT和 20 mM EDTA的环境下仍可以得到很高的产量和纯度:15 mL E.coli 细胞裂解液含有重组绿色荧光蛋白(GFP)和人 JNK1蛋白通过 250 µL PureCube INDIGO Ni-MagBeads 纯化. 整个实验过程中使用的缓冲液含有 10 mM DTT 和 20 mM EDTA. 每毫升磁珠最终纯化总量 89 mg 的GFP 和48 mg JNK1 . (MW: 分子量; E1-E3: 洗脱部分 1-3)
PureCube 100 INDIGO Ni-Agarose系列采用了全新的INDIGO配基。这款产品能够在20 mM DTT和20 mM EDTA环境下稳定纯化带有组氨酸标签的蛋白(图1)。和其他市面上同类产品比较,PureCube 100 INDIGO Ni-Agarose的也具有更高的蛋白结合能力(图2)。
图1:PureCube 100 INDIGO Ni-Agarose 适用于 20 mM EDTA和20 mM DTT环境体系。 SDS-PAGE显示通过E.coli 表达的GFP通过 PureCube 100 INDIGO Ni-Agarose纯化(纯化体系含有20 mM EDTA和20 mM DTT)获得很高的产量(>80 mg/ml) 和很高的纯度。
图2:PureCube 100 INDIGO Ni-Agarose 系列优于竞争者同类产品。组氨酸标签GFP 通过三种填料进行纯化. 缓冲液环境: pH 7.4, 10 mM DTT, 20 mM EDTA. 咪唑浓度: 结合: 10 mM, 清洗: 20 mM, 洗脱: 250 mM.
这款新型的INDIGO配基不会被EDTA洗脱,也不会在清洗的过程中被高pH的NaOH破坏。在不需要任何重生的前提下,PureCube 100 INDIGO Ni-Agarose可被反复使用8次以上,而其纯化的效率却没有任何降低(图3)。
图3:PureCube 100 INDIGO Ni-Agarose 可被反复使用多次而无须再生,纯化效率并无明显变化. 8份同样的含有GFP样品通过1毫升 PureCube 100 INDIGO Ni-Agarose进行纯化8轮纯化. 每轮之间纯化体系只简单使用缓冲液清洗(PBS 和10 mM咪唑).
M: 参照
L: 细胞裂解液
S: 含有GFP的细胞裂解液
Cube Biotech提供的PureCube 100 INDIGO Ni-Agarose是以50%悬浮液状态。为了方便通过Western Blot实验验证组氨酸标签蛋白,我们也提供高特异性组氨酸抗体—PentaHis antibody.
货号 | 产品 | 粒径 (μm) | 每柱 载量 | 运输 温度 | 储存 温度 | 应用 |
74701 | PureCube 100 NTA Agarose(1ml) | 100 |
根据结合 金属而定
| 室温 | 4° C | 可自行选择过度金属离子结合用于 His 标签重组蛋白的纯化,流速高达1000cm/h最大压力高达 300 kPa,pH稳定工作范围为 3-13,在10mM DTT,1 mM EDTA,1M NaOH 环境保持稳定 |
74703 | PureCube 100 NTA Agarose(10ml) | 100 | 室温 | 4° C | ||
74705 | PureCube 100 NTA Agarose(50ml) | 100 | 室温 | 4° C | ||
74710 | PureCube 100 NTA Agarose(250ml) | 100 | 室温 | 4° C | ||
74712 | PureCube 100 NTA Agarose(500ml) | 100 | 室温 | 4° C | ||
74715 | PureCube 100 NTA Agarose(1000ml) | 100 | 室温 | 4° C | ||
74720 | PureCube 100 NTA Agarose(5000ml) | 100 | 室温 | 4° C |
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